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HPLC-ELSD检测方法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）

Bge.Var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根。春秋两季采挖，除去须根及根头，晒干。

由于来源、产地、处理方式的不同，会导致黄芪的质量*不同，从而直接影响其药用价值，因此必须建立一套完整的质量控制方法。

一、实验过程

1.1 仪器

ELSD MODEL 200  SofTA Coporation

  液相系统：泵

  工作站：色谱采集系统

1.2 试剂

乙腈：色谱纯

水  ：纯净水

甲醇：色谱纯

黄芪甲苷对照品；黄芪注射液；黄芪阴性试剂

1.3 色谱系统及ELSD参数

  色谱柱：C18   5μ  250×4.6mm

流动相：乙腈：水（32：68）

流速：1.00 mL/min

ELSD参数： DF=60℃；SC=30℃

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下图为在上述色谱条件下测定的黄芪对照品与黄芪注射液ELSD色谱图：

1.4 曲线方程及线性关系

取对照品溶液配制成0.1、0.3、0.5、0.7、1mg/mL的溶液，以浓度对数值为横坐标，以峰面积对数值为纵坐标作回归，方程为：y=1.48528x+2.26890，r²=0.9997，进样量为20μL（满环进样），浓度在0.1-1mg/mL呈良好的线性关系。

1.5 系统适应性实验

取供试品溶液2.0mL，按上述色谱条件，满环进样20μL，黄芪甲苷的保留时间为9.5min左右，理论塔板数不低于10000，托尾因子为1.06左右，分离度不小于5.0。

1.6样品的含量测定

分别取黄芪注射液三批，按上述色谱条件，满环进样20μL。测定结果见表1。

表1样品中黄芪甲苷的含量测定

二、讨论

ELSD主要用于没有紫外吸收或为紫外末端弱吸收的样品，或流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基线漂移影响测定;用ELSD检测,流动相在漂移管便气化蒸发,不影响样品检测。

黄芪甲苷是黄芪为原料的中药制剂的主要质量控制指标。其含量测定方法有薄层色谱、HPLC—紫外放，采用ELSD作为检测器—HPLC法也已见报道，但都存在样品前处理复杂、色谱干扰多且干扰成分大等缺点。

由于ELSD本身的响应特性，黄芪甲苷浓度与其峰面积值并不呈线性，而将浓度与峰面积同时取以10为底的对数后可在一定范围内（0.1～1mg/ml）得到理想的线性关系（r²=0.9997）。